| Abstract | Cilj istraživanja: Razvoj i optimizacija te validacija metode kvantitativnog i kvalitativnog određivanja klorogenske i vanilinske kiseline pomoću tekućinske kromatografije ultravisoke djelotvornost vezane s masenim spektrometrom s trostrukim kvadripolom.
Materijali i metode: U istraživanju je korišten radni standard, smjesa klorogenske i vanilinske kiseline, od kojeg su pripravljene otopine u rasponu od 0,1 mg L-1do 20 mg L-1, te su iste korištene za optimizaciju parametara masenog spektrometra, tekućinske kromatografije te validaciju metode.
Rezultati: Kao otapalo izbora za smjesu vanilinske i klorogenske kiseline izabrana je smjesa vode i metanola u omjeru 50:50. Maseni spektrometar je optimiziran na napon na kapilari od 3500 V za klorogensku, a 3600 V za vanilinsku kiselinu, RF od 69 V za klorogensku kiselinu i 62 V za vanilinsku kiselinu, temperatura plina za formiranje finog spreja od 450 °C, i temperatura kapilare za prijenos iona od 350 °C. Korištena je nepokretna faza s C18 punilom kolone, te smjesa 0,5% octene kiseline u vodi, acetonitrila i metanola u omjerima 96:2:2 (0,0 min), 60:20:20 (7,5min), 96:2:2 (8,0 min) i 96:2:2 (8,0 10,4 min), kao pokretna faza te predstavljaju optimalne kromatografske parametre. Na temelju analize MS i MS/MS spektara pretpostavljene su strukture iona produkata i pretpostavljeni mehanizam njihove fragmentacije. Ispitani parametri validacije koji uključuju specifičnost, linearnost, točnost, preciznost, granicu kvantifikacije i detekcije te robusnost dali su zadovoljavajuće vrijednosti.
Zaključci: Tekućinska kromatografije ultravisoke djelotvornosti vezana sa spektrometrom masa s trostrukim kvadripolom je prikladna metoda za odjeljivanje smjese vanilinske i klorogenske kiseline te kvalitativno i kvantitativno određivanje klorogenske i vanilinske kiseline. Razvijena metoda je validirana čime je osigurana njena prikladnost za određivanje smjese klorogenske i vanilinske kiseline. |
| Abstract (english) | Objectives: Development, optimization and validation of themethod for quantitative and qualitative determination of chlorogenic and vanillic acid using ultrahigh efficiency liquid chromatography coupled with triple quadrupole mass spectrometer.
Material and methods: In this study a working standard prepared as a mixture of chlorogenic and vanillic acid was used to prepare solutions ranging from 0.1 mg L-1 to 20 mg L-1. These solution swere used for optimization of mass spectrometer and liquid chromatography parameters as well as for method validation.
Results: Mixture of water and methanol (50:50) was chosen as the solvent for dissolution of the vanillic and chlorogenic acid mixture. Mass spectrometer was optimized for capillary voltage of 3500 V for chlorogenic and 3600 V for vanillic acid, RF of 69 V for chlorogenic acid and 62 V for vanillic acid, vaporizer temperature of 450 °C, and ion transfer tube temperature of 350 °C. Stationary phase with C18 column filling and a mixture of 0.5% acetic acid in water, acetonitrile and methanol in the ratios 96:2:2 (0,0 min), 60:20:20 (7,5min), 96:2:2 (8,0 min) and 96:2:2 (8,0 10,4 min), was used as the mobile phase represent optimal chromatographic parameters. Based on the analysis of MS and MS/MS spectra, the structures productions and the possible mechanism of their fragmentation were given. Examined validation parameters including specificity, linearity, accuracy, precision, limit of quantification and detection, and robustness yielded satisfactory values.
Conclusions: Ultra-high performance liquid chromatography coupled with a triple quadrupole mass spectrometer is a suitable method for the separation of a mixture of vanillic and chlorogenic acid and qualitative and quantitative determination. The developed method was validated to ensure its suitability for the determination of chlorogenic and vanillic acid mixture. |
